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前 言
本標(biāo)準(zhǔn)第4章為強(qiáng)制性條款。為消除公共場(chǎng)所使用紡織品存在的衛(wèi)生、質(zhì)量的隱患,保障消費(fèi)者的健康、衛(wèi)生,規(guī)范公共場(chǎng)所使用紡織品的市場(chǎng)需求,制定本標(biāo)準(zhǔn)。
本標(biāo)準(zhǔn)按GB / T1.1 —2000 《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第 1 部分:標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》 編制。
本標(biāo)準(zhǔn)附錄 A 、附錄 B 、附錄 C 、附錄 D 為規(guī)范性附錄,附錄 E 為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省纖維檢驗(yàn)所(江蘇省紡織產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省纖維檢驗(yàn)所(江蘇省紡織產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心)、南京金龍紡實(shí)業(yè)有限公司、江蘇康乃馨織造有限公司、南通斯得福紡織裝飾有限公司起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:李輝、石慶、魏長(zhǎng)生、周觀林。
公共用紡織品安全技術(shù)規(guī)范
1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了公共用紡織品安全技術(shù)規(guī)范的術(shù)語和定義、要求、試驗(yàn)方法。
本規(guī)范適用于江蘇省境內(nèi)公共場(chǎng)所用紡織品的要求。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB 251—1995 評(píng)定沾色用灰色樣卡
GB/T5455—1997 紡織品燃燒性能試驗(yàn)垂直法
GB/T7573—2002 紡織品水萃取液 PH 值的測(cè)定
GB/T817—1987 數(shù)值修約規(guī)則
GB18383 — 2007 絮用纖維制品通用技術(shù)要求
GB 18401 — 2003 國(guó)家紡織產(chǎn)品基本安全技術(shù)規(guī)范
FZ / T62006 —2004 毛巾
3 術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3 . 1 公共用紡織品 linen supply
在公共場(chǎng)所,供不同的人,反復(fù)多次使用的紡織品,如:床上用品、毛巾類產(chǎn)品、服裝、餐廳用紡織品、窗簾等。
3 . 2 醫(yī)療用公共用紡織品 hospital textiles
醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)使用的公共用紡織品,如:病房及疹療用紡織品、毛巾類產(chǎn)品、病員服等。
3 . 3 非醫(yī)療用公共用紡織品hotel textiles
不在醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)使用的公共用紡織品。
3 . 4 人體掉落物 body secretion
從人身體上分泌、排泄、脫落的物質(zhì)。
4 要求
4 . 1 分類
公共用紡織品按使用類型分為為醫(yī)療用和非醫(yī)療用 2 類。
4 . 2
安全指標(biāo)公共用紡織品安全指標(biāo)見表 1 。
4 . 3 公共用紡織品中毛巾類產(chǎn)品、床單、被套、枕套、服裝不應(yīng)經(jīng)過抗菌、阻燃處理。
4 . 4 非醫(yī)療用公共用紡織品不應(yīng)用醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)部的洗滌設(shè)備進(jìn)行洗滌;醫(yī)療用公共用紡織品不應(yīng)
賓館、飯店等單位內(nèi)部的洗滌設(shè)備進(jìn)行洗滌;對(duì)外開展洗滌服務(wù)的公司,開展洗滌業(yè)務(wù)時(shí),應(yīng)分別處理醫(yī)療用公共用紡織品和非醫(yī)療用公共用紡織品(包括設(shè)備、環(huán)境、人員)。
4 . 5 公共用紡織品中填充物應(yīng)符合 GB18383 的規(guī)定。
5 試驗(yàn)方法
5 . 1 細(xì)菌、真菌
5 . 1 . 1 取樣
以無菌操作用滅菌生理鹽水或 PBS 濕潤(rùn) 3 個(gè)無菌醫(yī)用棉拭子,并分別在3個(gè) 25cm2 (5cm×5cm)取樣處均勻涂抹三次,立即用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分,將3個(gè)棉拭子涂抹部分放入盛有30ml滅菌生理鹽水或 PBS 的容器中密封,每個(gè)容器為一份樣本,(1—5)℃ 保存, ( 4—6 ) h 內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。將放有棉拭子的容器充分振搖,此液為 1 : 10 稀釋液。
5 . 1 . 2 菌落總數(shù)
按附錄 A 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 1 . 3 大腸菌群
按附錄 B 規(guī)定進(jìn)行。
5 .1 . 4 致病菌
按附錄 C 規(guī)定進(jìn)行。
5 .1 . 5 真菌總數(shù)
按附錄 A 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 2 萃取液pH值
5 . 2 . 1 取樣
樣品用0 . l mol / l 氯化鉀溶液(用蒸餾水或去離子水配制)室溫浸泡,浴比 1 : 50 ,浸泡時(shí)間為 1h 士 5min ,每10min 翻動(dòng)一次,浸泡結(jié)束,取3份液樣進(jìn)行檢測(cè)。
5 .2 .2 檢驗(yàn)方法
按GB / T7573 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 3 異味
按GB18401 —2003 中 6 . 7 規(guī)定進(jìn)行,異味種類增加氯、汗、血腥等氣味。
5 . 4 色污漬
按GB251 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 5 人體掉落物
按附錄 D 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 6 吸水性
按FZ / T62006—2004 中附錄 A 規(guī)定進(jìn)行。
5 . 7 阻燃性
按GB / T5455 規(guī)定進(jìn)行。
警告 ― 使用本標(biāo)準(zhǔn)微生物檢驗(yàn)的人員應(yīng)有微生物知識(shí)和正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧⒈WC符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。
附錄 A
(規(guī)范性附錄)
菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法
A . 1 細(xì)菌菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法
A . 1 . 1 以無菌(100 級(jí))操作,吸取 1 : 10 稀釋液 2.0ml 檢樣,分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi),每皿 1 . 0 ml 。當(dāng)估計(jì)含菌量過高時(shí)(每平皿生長(zhǎng)菌落數(shù)超過 300 個(gè)),可將采樣液作十倍遞增稀釋后再接種,即吸取1.0ml 加到9.0ml 滅菌生理鹽水中,混勻,此液為 1 : 100 稀釋液,每個(gè)稀釋度也做兩個(gè)平皿。
A . 1 . 2 將已融化冷卻至 45 ℃ 左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約(15一20 ) ml ,并輕輕旋搖平皿,使樣液混勻,待培養(yǎng)基凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿使底向上,置于(36士1)℃ 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48h 。
A . 2 菌落數(shù)計(jì)算
作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí),可用肉眼直接觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏,在記下各平皿的菌落數(shù)后,求出同一稀釋度各平皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落,該平皿不計(jì)數(shù);若片狀菌不到平皿中的一半,而其余一半中菌落分布均勻,則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以 2 ,所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。
菌落總數(shù)按公式(A .1)計(jì)算:
M=k×n……………………………………………………………………………… ( A . l )
式中:m—— 細(xì)菌菌落總數(shù), cfu / 25cm2;
k —— 稀釋倍數(shù);
n —— 平均菌落數(shù)。
A . 3 菌落計(jì)數(shù)報(bào)告
A . 3 . 1 選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù)(見表A.1中例1)。
A .3 . 2 若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均在 30—300 之間,則由兩菌落總數(shù)之比值來決定,若其比值小于或等于2 ,應(yīng)報(bào)告平均數(shù),若大于2 ,則報(bào)告其中稀釋度較低的平皿菌落數(shù)(見表A .1中例2 、例3)。
A . 3 . 3 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300 , 則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告(見表A .1中例4)。
A . 3 . 4 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30 ,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告(見表A , 1中例5)。
A . 3 . 5 若所有稀釋度平均菌落數(shù)均不在 30 —300 之間,其中一個(gè)稀釋度平均菌落數(shù)大于 300 ,而相鄰的另一個(gè)稀釋度平均菌落數(shù)小于 30 ,則以接近 30 或300 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告(見表A .l中例 6)。
A . 3 . 6 若所有的稀釋度都無菌生長(zhǎng),報(bào)告數(shù)為小于1 cfu / 25cm2(見表A.1中例7 )。
A . 3 . 7 菌落計(jì)數(shù)報(bào)告,菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時(shí),按實(shí)際數(shù)值報(bào)告,大于等于 100 時(shí),采用二位有效數(shù)字,按GB / TS 170《 數(shù)值修約規(guī)則》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行舍取,可用科學(xué)計(jì)數(shù)法進(jìn)行表示(見表A .1中報(bào)告方式欄)。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí),應(yīng)注明樣品的稀釋度。
A . 4 真菌菌落總數(shù)檢測(cè)方法
真菌的檢測(cè)程序與細(xì)菌檢測(cè)操作程序基本相同,主要區(qū)別在于所用培養(yǎng)基、間不同。真菌培養(yǎng)用沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)溫度(25士l )℃ ,培養(yǎng)時(shí)間為5d 。要隨意打開培養(yǎng)皿的蓋,以防止真菌袍子四處飛揚(yáng)污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境。培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)計(jì)數(shù)菌落數(shù)時(shí),不要隨意打開培養(yǎng)皿的蓋,以防止真菌孢子四處飛揚(yáng)污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
附錄B
(規(guī)范性附錄)
大腸菌群檢驗(yàn)方法
B . 1 操作步驟
以無菌(100 級(jí))操作,取1:10 稀釋液 5ml 接種于50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管,置(36士1 ) ℃培養(yǎng)24h , 如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣,則報(bào)告為大腸菌群陰性。
如產(chǎn)酸產(chǎn)氣,則劃線接種伊紅美藍(lán)瓊脂平板,置(36士l)℃ 培養(yǎng)(18—24 ) h ,觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色,圓形,邊緣整齊,表面光滑濕潤(rùn),常具有金屬光澤,也有的呈紫黑色,不帶或略帶金屬光澤,或粉紅色,中心較深的菌落。
取疑似菌落 1—2 個(gè)作革蘭氏染色鏡檢,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置(36士l)℃ 培養(yǎng) 24h ,觀察產(chǎn)氣情況。
B . 2 結(jié)果報(bào)告
凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣,,乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣,在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落,革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌,可報(bào)告被檢樣品檢出大腸菌群。
附錄 C
(規(guī)范性附錄)
致病菌檢驗(yàn)方法
C . 1 綠膿桿菌檢測(cè)方法
C . 1 . 1 操作步驟
以無菌(100 級(jí))操作,取1 : 10 稀釋液 5ml ,加入到 50ml SCDLP 培養(yǎng)液中,充分混勻,置(36士1 ) ℃ 培養(yǎng)(18—24 ) h 。如有綠膿桿菌生長(zhǎng),培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜。培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物,劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板,置(36士l)℃ 培養(yǎng)(18—24 ) h ,觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,菌落扁平,邊緣不整,光滑濕潤(rùn),呈灰白色,菌落周圍培養(yǎng)基常擴(kuò)散有水溶性色素。此培養(yǎng)基選擇性強(qiáng),大腸桿菌不能生長(zhǎng),革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)較差。在缺乏十六烷三甲基溴化銨瓊脂時(shí)也可用乙酰胺培養(yǎng)基進(jìn)行分離,從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物,劃線接種于乙酰胺瓊脂平板,置(36士l)℃ 培養(yǎng)(18—24 ) h ,觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,菌落扁平,邊緣不整,菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色,其他菌不生長(zhǎng)。
取可疑菌落涂片作革蘭氏染色,鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):
氧化酶試驗(yàn):取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi),用無菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上,然后在其上滴加一滴新配制的l%二甲基對(duì)苯二胺試液,(15—30 ) s 內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色,為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性,不變色者為陰性。
綠膿菌素試驗(yàn):取2—3個(gè)可疑菌落,分別接種在綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基( PDP )斜面, ( 36 士 l ) ℃ 培養(yǎng)( 20 — 24 ) h ,加入氯仿(************)(3—5 ) ml ,充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解于氯仿液內(nèi),待氯仿(************)提取液呈藍(lán)色時(shí),用吸管將氯仿移到另一試管中并加入 1mol / l 的鹽酸 1ml ,振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽(yáng)性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。
硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn):挑取被檢菌落純培養(yǎng)物接種在硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中,置(36士l)℃ 培養(yǎng)24h ,硝酸鹽胨水培養(yǎng)基的小倒管中有氣體者即為陽(yáng)性。表明該菌能還原硝酸鹽,并將亞硝酸鹽分解產(chǎn)生氮?dú)狻?br style="margin: 0px; padding: 0px; font-size: 12px; list-style: none; text-indent: 2em;"/> 明膠液化試驗(yàn):取可疑菌落純培養(yǎng)物,穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi),置(36士1)℃ 培養(yǎng) 24h,取出放于(4—10 )℃ 冰箱30min ,如仍呈溶解狀液態(tài)為陽(yáng)性,凝固不溶者為陰性。
42 ℃ 生長(zhǎng)試驗(yàn):取可疑培養(yǎng)物,接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上,置(41—42 )℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(24一48 ) h ,有綠膿桿菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性。
C . 1 . 2 結(jié)果報(bào)告
被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后,證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌,氧化酶及綠膿桿菌試驗(yàn)為陽(yáng)性者,即可報(bào)告為被檢樣品中檢出綠膿桿菌。當(dāng)綠膿菌素試驗(yàn)為陰性時(shí),但液化明膠試驗(yàn)、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)和42 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí),仍可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。
C . 2 金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法
C . 2 . 1 操作步驟
以無菌(100 級(jí))操作,取 l : 10 稀釋液 5ml ,加入到 50mLSCDLP 培養(yǎng)液中,充分混勻,置(36士l ) ℃培養(yǎng)24h 。
自上述增菌液中取1—2 接種環(huán),劃線接種在 Baird Parker 氏培養(yǎng)基,如無此培養(yǎng)基,也可劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上,置(36士1)℃ 培養(yǎng)(24一48 ) h 。在血瓊脂平板上該菌落呈金黃色,大而突起,圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈。在Baird Parker 氏培養(yǎng)基上為圓形,光滑,濕潤(rùn),菌落直徑為(2—3 )mm ,顏色呈灰色至黑色,邊緣為淡色,周圍為一混濁帶,在其外層有一透明帶。
染色鏡檢:挑取典型菌落,涂片作革蘭氏染色鏡檢,金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌,排列成葡萄狀,無芽孢與夾膜,直徑為(0 . 5—1 . 0)μm。鏡檢符合上述情況,應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):
甘露醇發(fā)酵試驗(yàn):取上述菌落接種甘露醇培養(yǎng)液,置(36士l)℃ 培養(yǎng) 24h ,發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽(yáng)性。
血漿凝固酶試驗(yàn):
波片法:取清潔干燥載玻片,一端滴加一滴生理鹽水,另一端滴加一滴兔血漿,挑取菌落分別與生理鹽水和血漿充分研磨混合,血漿與菌苔混懸液在5min 內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊時(shí),而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象為陽(yáng)性,如兩者均無凝固現(xiàn)象為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿均有凝固現(xiàn)象,再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn)。
試管法:吸取1:4 新鮮血漿0 .5ml ,放入滅菌小試管中,再加入待檢菌24h 肉湯培養(yǎng)物0 .5ml ?;靹?,放(36士1)℃ 培養(yǎng)箱或水浴中,每30min觀察一次,24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽(yáng)性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0 .5ml 作為陽(yáng)性與陰性對(duì)照。
C . 2 . 2 結(jié)果報(bào)告
凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長(zhǎng),鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性葡萄球菌,并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸,血漿凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性者,可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。
C . 3 溶血性鏈球菌檢測(cè)方法
C . 3 . 1 操作步驟
以無菌( 100 級(jí))操作,取 1 : 10 稀釋液 5ml 加入到50ml葡萄糖肉湯中,置于(36 士 l )℃ 培養(yǎng) 24h 。
將培養(yǎng)物劃線接種于血瓊脂平板,( 36士1)℃培養(yǎng)24h 觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色,半透明或不透明,針尖狀突起,表面光滑,邊緣整齊,周圍有無色透明溶血圈。
染色鏡檢:挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢,應(yīng)為革蘭氏陽(yáng)性,呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況,應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn):
鏈激酶試驗(yàn):吸取草酸鉀血漿 0.2ml ( 0 . 01g 草酸鉀加5ml兔血漿混勻,經(jīng)離心沉淀,吸取上清液),加入0.8ml 滅菌生理鹽水,混勻后再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物0 .5ml和0.25%氯化鈣0 .25ml , 混勻,放(36士l)℃ 水浴中,2min 觀察一次(一般 10min 內(nèi)可凝固),待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄熔化時(shí)間。如 2h 內(nèi)不熔化,繼續(xù)放置 24h 觀察,如凝塊全部熔化為陽(yáng)性,24h仍不熔化為陰性。
桿菌肽敏感試驗(yàn):將被檢菌落液涂于血平板上,用滅菌鑷子取每片含0.04單位桿菌肽的紙片放在平板表面上,同時(shí)以己知陽(yáng)性菌株作對(duì)照,在(36士2)℃ 下放置(18—24 ) h ,有抑菌帶者為陽(yáng)性。
C . 3 . 1 結(jié)果報(bào)告
鏡檢革蘭氏陽(yáng)性鏈狀排列球菌,血平板上呈現(xiàn)溶血圈,鏈激酶和桿菌肽試驗(yàn)陽(yáng)性,可報(bào)告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。
附錄 D
(規(guī)范性附錄)
人體掉落物檢驗(yàn)方法
D . 1 原理
以人眼感觀檢測(cè)樣品上是否有毛發(fā)、皮屑、體液、污漬等。
D. 2 試驗(yàn)條件
檢測(cè)人員應(yīng)先洗臉、洗手,并將頭發(fā)、手、臂等密封起來,以防自身污染影響檢測(cè)結(jié)果。
D. 3 樣品
毛巾類用品、服裝等可以是擺放好待用的,也可以是擺放前成包的;床上用品應(yīng)該是擺放好待用的。
D. 4 方法
現(xiàn)場(chǎng)以人眼感觀檢驗(yàn)為主,需要時(shí)可輔以(l—2)倍的放大鏡、尖嘴鑷子檢測(cè)是否有毛發(fā)、皮屑、體液、污漬等,對(duì)最大尺寸小于1.0mm的物體不予以判斷,檢測(cè)到的物質(zhì)應(yīng)收集、密封保存。
附錄 E
(資料性附錄)
培養(yǎng)基與試劑制備
E.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 3.0g
氯化鈉 5.0g
瓊脂 15g—20g
蒸餾水 I000ml
制法:除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中,調(diào)pH至7.2—7.4,加入瓊脂,加熱溶解,分裝試管,121 ℃ 高壓滅菌 20min 后備用。
E.2 乳糖膽鹽發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20.0g
豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 5.0g
乳糖 10.0g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 加至1000ml
制法:將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH至7.4,加入指示劑,分裝每管 50ml ,并放入一個(gè)小倒管, 115℃ 高壓滅菌15min后備用。
E.3 乳糖發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20.0g
乳糖 10.0g
0 . 04 %溴甲酚紫水溶液 25 ml
蒸餾水 加至1000ml
制法:將蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH至7.4 ,加入指示劑,分裝每管 10ml ,并放入一個(gè)小倒管, 115 ℃高壓滅菌15min后備用。
E.4伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB )
成分:
蛋白胨 20.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鉀 2.0g
瓊脂 15g 一 20g
2 %伊紅 Y溶液 20ml
0.65 %美藍(lán)溶液 10ml
蒸餾水 加至 1000ml
制法:將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,校正pH至7.1,分裝于燒瓶?jī)?nèi),121 ℃ 高壓滅菌 15min 備用,臨用時(shí)并加熱溶化瓊脂加入乳糖(過濾滅菌),冷至 55 ℃ ,加入伊紅和美藍(lán)溶液搖勻,傾注平板。
E.5SCDLP 液體培養(yǎng)基
成分:
酪蛋白胨 17 . 0g
大豆蛋白胨 3 . 0g
氯化鈉 5 . 0g
磷酸氫二鉀 2 . 5g
葡萄糖 2 . 5g
卵磷脂 1 . 0g
吐溫 80 7 . 0g
蒸餾水 1000ml
制法:將各種成分混合(如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨也可用日本多價(jià)胨代替),加熱溶解,調(diào)pH 至7.2 — 7.3 ,分裝, 121 ℃ 高壓滅菌 20min ,搖勻,避免吐溫80沉于底部,冷至 25 ℃ 后使用。
E.6十六烷三甲基溴化銨培養(yǎng)液
成分:
牛肉膏 3 . 0g
蛋白胨 10.0g
氯化鈉 5 . 0g
十六烷三甲溴銨 0.3g瓊脂 15g —20g
蒸餾水 1000ml
制法:除瓊脂外,上述各成分混合加熱溶解,調(diào)pH 至 7.4 一 7.6 ,然后加入瓊脂, 115℃ 高壓滅菌 20min ,冷至 55 ℃ 左右,傾注平皿。
E.7 乙酰胺培養(yǎng)基
成分:
乙酰胺 10.0g
氯化鈉 5.0g
無水磷酸氫二鉀 1.39g
無水磷酸二氫鉀 0.73g
硫酸鎂( MgSO 4? 7H2O ) 0.5g
酚紅 0.012g
瓊脂 15g一 20g
蒸餾水 1000ml
制法:除瓊脂和酚紅外,將其他成分加到蒸餾水中,加熱溶解,調(diào)pH 至 7.2—7.4,然后加入瓊脂和酚紅,121 ℃ 高壓滅菌 20min 后,制成平板備用。
E.8 綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基斜面
成分:
蛋白胨 20.0g
氯化鎂 1 . 4g
硫酸鉀 10 . 0g
瓊脂 15g—20g
甘油(化學(xué)純) 10.0g
蒸餾水 加至1000ml
制法:將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中,加熱溶解,調(diào)pH 至7.4,加入瓊脂和甘油,加熱溶解,分裝試管,l15 ℃高壓滅菌20min ,制成斜面?zhèn)溆谩?br style="margin: 0px; padding: 0px; font-size: 12px; color: rgb(0, 0, 0); list-style: none; text-indent: 2em;"/>E.9 明膠培養(yǎng)基
成分:
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 5.0g
明膠 120g
蒸餾水 1000ml
制法:各成分加入蒸餾水中浸泡20min ,加熱攪拌溶解,調(diào)pH 至7.4, 5ml分裝于試管中, 115 ℃高壓滅菌20min ,直立制成高層備用。
E.10 硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10.0g
酵母浸膏 3.0g
********* 12.0g
亞硝酸鈉 0.5g
蒸餾水 1000ml
制法:將蛋白胨與酵母浸膏加到蒸餾水中,加熱溶解,調(diào)pH至7.2,煮沸過濾后補(bǔ)足液量,加入*********和亞硝酸鈉溶解均勻,分裝到加有小倒管的試管中,115 ℃高壓滅菌20min 備用。
E.11 Baird Parker 培養(yǎng)基
成分:
胰蛋白胨 10.0g
牛肉膏 5.0g
酵母浸膏 1.0g
丙酮酸鈉 10.0g
甘氨酸 12.0g
氯化鋰( LiC1 ? 6HzO ) 5.0g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000ml
增菌劑的配制: 30% 卵黃鹽水50ml 與除菌過濾的1%亞碲酸鉀溶液10ml 混合,保存于冰箱內(nèi)備用。
制法:將各成分加到蒸餾水中,加熱煮沸完全溶解,冷至25 ℃調(diào)pH7.2。 分裝每瓶95ml , 121 ℃ 高壓滅菌20min 后備用。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂,每95ml加入預(yù)熱至50 ℃ 的卵黃亞碲酸鉀增菌劑 5ml ,搖勻后傾注平板。培養(yǎng)基應(yīng)是致密不透明的,使用前在冰箱儲(chǔ)存不得超過18h。
E.12 血瓊脂培養(yǎng)基
成分:
營(yíng)養(yǎng)瓊脂 100ml
脫纖維羊血(或兔血) 10ml
制法:將滅菌后的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱溶化,涼至55 ℃ 左右,用無菌方法將10ml脫纖維血加入后搖勻,傾注平皿置冰箱備用。
E.13 甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 5.0g
氯化鈉 5.0g
甘露醇 10.0g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12ml
蒸餾水 1000ml
制法:將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中,加熱溶解,調(diào)pH至7.4,加入甘露醇和溴麝香草酚藍(lán)混勻后,分裝試管,115℃高壓滅菌20min備用。
E.14 葡萄糖肉湯
成分:
蛋白胨 10.0g
牛肉膏 5.0g
氯化鈉 5.0g
葡萄糖 10.0g
蒸餾水 1000ml
制法:上述成分溶于蒸餾水中,調(diào)pH 至 7.2—7.4 ,加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min后備用。
E.15 兔血槳
制法:取滅菌3.8%檸檬酸鈉1份,兔全血4份,混勻靜置,3000r / min 離心5min ,取上清,棄血球。
E.16 沙堡氏瓊脂培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 40.0g
瓊脂 15g —20g
蒸餾水 1000ml
制法:用700ml 蒸餾水將瓊脂溶解,300ml蒸餾水將葡萄糖與蛋白胨溶解,混合上述兩部分,搖勻后分裝,l15℃高壓滅菌15min備用。使用前,用過濾除菌方法加入 0.1g/l 的氯霉素或者 0.03g/l的鏈霉素。
定性試驗(yàn)采用沙氏培養(yǎng)液,除不加瓊脂外其他成分與制法同上。
E.17 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液
成分:
蛋白胨 10.0g
氯化鈉 5.0g
牛肉膏 3.0g
蒸餾水 1000ml
制法:調(diào)節(jié)pH 至7.2—7.4,分裝, 115℃高壓滅菌20min備用。
E.18 澳甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 5.0g
蒸餾水 1000ml
制法:調(diào)節(jié)pH至7.0—7.2 ,加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6ml , 115℃高壓滅菌20min備用。
E.19 革蘭氏染色液
結(jié)晶紫染色液:
結(jié)晶紫 1.0g
95%乙醇 20ml
1%草酸銨水溶液 80ml
將結(jié)晶紫溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合。
革蘭氏碘液
碘 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300ml
脫色劑
95 %乙醇
復(fù)染液:
(1) 沙黃復(fù)染液:
沙黃 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸餾水 90ml
將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋。
(2) 稀石炭酸復(fù)紅液:
稱取堿性復(fù)紅10g ,研細(xì),加95%乙醇100ml ,放置過夜,濾紙過濾。取該液10ml,加5%石炭酸水溶液90ml混合,即為石炭酸復(fù)紅液。再取此液10ml ,加水90ml ,即為稀石炭酸復(fù)紅液。
E.20 0.03mol / L 磷酸鹽緩沖液(PBS , pH7.2)
成分:
磷酸氫二鈉 2.83g
磷酸二氫鉀 1.36g
蒸餾水 1000ml